El certificado de análisis (COA) es el documento que vincula un lote con los ensayos que lo caracterizan. Saber leerlo permite decidir si un reactivo sirve para un experimento antes de usarlo.
1. Identificación del lote
El certificado indica el número de lote, la fecha de análisis y el laboratorio que realizó los ensayos. El número de lote tiene que coincidir con el rótulo del vial que recibiste.
2. Identidad: espectrometría de masas
La espectrometría de masas con ionización por electrospray (ESI-MS) mide la relación masa/carga. Los péptidos suelen aparecer como iones con varias cargas, por ejemplo [M+2H]²⁺ y [M+3H]³⁺, y el software reconstruye la masa molecular. Compará la masa observada con la teórica:
- Diferencias de pocas décimas de dalton son normales.
- +16 Da suele indicar oxidación, típicamente de metionina.
- −18 Da indica pérdida de agua.
- Una diferencia igual a la masa de un residuo sugiere una deleción.
3. Pureza: HPLC
La cromatografía líquida de fase reversa separa el péptido de sus impurezas. La detección a 214 nm registra el enlace peptídico, por lo que responde a casi todas las especies peptídicas. La pureza se informa como el área del pico principal sobre el área total: un 99 % significa que el 99 % de la señal a 214 nm corresponde al péptido buscado. No es el porcentaje de péptido en el polvo.
- El cromatograma debería mostrar un pico principal nítido y su tiempo de retención.
- Los picos pequeños antes del principal suelen ser secuencias truncadas, más hidrofílicas.
- Los picos pegados al principal pueden ser isómeros D o deleciones difíciles de separar.
4. Contenido neto de péptido
Además del péptido, el liofilizado contiene contraiones (TFA o acetato) y agua. Si el certificado informa el contenido neto de péptido, usalo para calcular las concentraciones de trabajo.
5. Endotoxinas
Se miden con el ensayo LAL y se expresan en unidades de endotoxina por miligramo (EU/mg). Cuanto más bajo el valor, mejor para ensayos con células inmunes. Verificá el límite que exige tu protocolo.
6. Integridad del documento
Cuando el certificado original del laboratorio está publicado en wwup., su hash SHA-256 aparece junto al lote. Si calculás el hash del archivo descargado y coincide, el documento no fue modificado:
sha256sum COA-WW-BPC-402-laboratorio.pdf # Linux o macOS
certutil -hashfile COA-WW-BPC-402-laboratorio.pdf SHA256 # Windows